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細(xì)胞培養(yǎng)的相關(guān)知識(shí)您了解嗎?

更新時(shí)間:2022-07-27  |  點(diǎn)擊率:757

支原體最早發(fā)現(xiàn)于1898年,1956年Robinson等從細(xì)胞培養(yǎng)物中分離出支原體,之后國內(nèi)外關(guān)于支原體污染細(xì)胞的報(bào)道屢見不鮮。它廣泛存在于自然界中,有80余種,污染細(xì)胞常見的支原體包括發(fā)酵支原體( M.fementans)、豬鼻支原體(M.hyorhinis)、口腔支原體(M.orale)、精氨酸支原體(M.arginina)、梨支原體(M.pirum)、唾液支原體(M.salivarium)和人型支原體(M.hominis)。

支原體通常附著在細(xì)胞的表面,并影響其宿主細(xì)胞的生理、遺傳等多方面的正常功能,用這些污染后貌似正常的細(xì)胞做試驗(yàn)或生產(chǎn),將會(huì)嚴(yán)重影響結(jié)果。
1、對(duì)細(xì)胞生長繁殖和形態(tài)的影響
細(xì)胞培養(yǎng)物被支原體污染后生長減慢,且產(chǎn)生細(xì)胞病變(cytopathic effect, CPE),表現(xiàn)為細(xì)胞體積增大,碎片增多,在細(xì)胞質(zhì)中產(chǎn)生一些顆粒;細(xì)胞內(nèi)病毒繁殖受阻,使細(xì)胞形成空斑。光鏡下形成不正常密度生長的單層,貼壁細(xì)胞形成“流沙樣”脫落、裂解。某些支原體可在侵入細(xì)胞8h使線粒體膨脹,繼而被破壞,細(xì)胞核萎suo呈空泡化,細(xì)胞微管解聚,培養(yǎng)瓶中細(xì)胞與細(xì)胞間隙出現(xiàn)膜狀沉積,細(xì)胞無法傳代,甚至整個(gè)細(xì)胞群體溶解。
2、對(duì)細(xì)胞代謝和功能的影響
有些被污染后的細(xì)胞,雖形態(tài)上變化不明顯,但培養(yǎng)液pH變化較大,更換培養(yǎng)液后幾小時(shí)就變酸,培養(yǎng)基中的必需氨基酸被消耗掉,如谷氨酸或核苷前體,改變細(xì)胞代謝。
支原體吸附在細(xì)胞表面,破壞細(xì)胞膜的完整性,影響細(xì)胞信號(hào)傳遞;消耗細(xì)胞的核苷庫,引起細(xì)胞染色體異常;發(fā)酵型支原體能迅速降解簡單糖類,代謝產(chǎn)生的酸能改變細(xì)胞的功能;利用精氨酸的支原體則發(fā)生精氨酸效應(yīng),從而影響蛋白質(zhì)和核酸的合成、導(dǎo)致細(xì)胞的分裂和生長受阻;引起細(xì)胞酶譜改變;由于支原體對(duì)細(xì)胞膜的吸附,干擾膜受體的功能,改變信號(hào)傳遞,破壞膜的完整性。在單克隆抗體制備中,骨髓瘤或雜交瘤細(xì)胞因支原體的污染而導(dǎo)致融合失敗或抗體分泌能力下降以至喪失。
3、引起染色體異常
改變?nèi)旧w組型,通??蓪?dǎo)致細(xì)胞染色體斷裂、數(shù)目減少,出現(xiàn)雙著絲點(diǎn)染色體、環(huán)狀染色體等。
4、對(duì)免疫細(xì)胞產(chǎn)量的影響

支原體能影響巨噬細(xì)胞的活性,抑制干擾素的合成和降低其活性,加大了繼發(fā)感染其他細(xì)菌和病毒的幾率,同時(shí),通過植物血凝素干擾淋巴細(xì)胞的刺激、分化。

 

在PCR實(shí)驗(yàn)室中,DNA污染很難*清除。即使只有一個(gè)污染的DNA分子被檢測到,也會(huì)使整個(gè)PCR檢測過程出現(xiàn)誤差。

為確保PCR試驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確,預(yù)防DNA或RNA交叉污染,PCR實(shí)驗(yàn)室大多會(huì)常備DNA/RNA污染清除劑。

 

特點(diǎn)

1. 快速有效地清除DNA或RNA污染。1分鐘起效。

2. 可直接使用。

3. 保護(hù)實(shí)驗(yàn)人員,避免接觸DNA污染。

4. 非堿性,無致癌性,成分安全。

 

PCR Clean™濕巾 使用方法

直接用PCR Clean™濕巾擦拭PCR實(shí)驗(yàn)物品表面,

反應(yīng)1分鐘后,用干凈紙巾擦干試劑即可。

注意:

1. 對(duì)于實(shí)驗(yàn)室電器化設(shè)備,推薦使用PCR Clean™紙巾。

2. 在PCR操作前后均可使用。

儲(chǔ)存條件

室溫保存,效期至少12個(gè)月。

低溫可能會(huì)形成沉淀,但在37℃迅速溶解。

即使在65°C條件下存放兩周,也不會(huì)影響噴霧劑的祛除效果

 

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