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細(xì)胞死亡及生長異常

更新時(shí)間:2022-02-28  |  點(diǎn)擊率:807

1、首先講一下細(xì)胞生長緩慢的原因:

a)更換了血清或者培養(yǎng)基,細(xì)胞需要一段時(shí)間適應(yīng)一下;

b)由于細(xì)胞的特殊種類,培養(yǎng)基中缺少某些生長因子;

c)培養(yǎng)基中有少量真菌或者細(xì)菌污染;

d)傳代的時(shí)候細(xì)胞密度過低;

e)細(xì)胞狀態(tài)老化;

f)支原體污染。

2、解決上述問題的方法:

a)如果實(shí)驗(yàn)室沒有某種細(xì)胞最適宜的培養(yǎng)基,可以先用原培養(yǎng)條件凍存一些,然后逐漸增加新的培養(yǎng)基比例,25%、50%、75%到100%,傳代3-5次后,讓細(xì)胞慢慢適應(yīng)。

b)判斷是不是培養(yǎng)基發(fā)生污染,可以先不加抗生素,觀察細(xì)胞狀態(tài)。

c)增加細(xì)胞的接種密度。

d)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞老化的時(shí)候,及時(shí)更換新的細(xì)胞。

e)如果懷疑是支原體污染,一定要隔離疑似污染的培養(yǎng)皿,及時(shí)清潔消毒孵箱。

3、造成細(xì)胞死亡的原因:

a)細(xì)胞消化過度;

b)沒有及時(shí)換液,營養(yǎng)成分消耗殆盡;

c)如果前一天細(xì)胞的狀態(tài)很好,換液之后就全死了,應(yīng)該考慮是否是培養(yǎng)基或者血清的問題。

4、如何判定細(xì)胞是否發(fā)生支原體污染:可以選用直接培養(yǎng)法、熒光染色或PCR方法檢測,比較常用的是PCR。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生支原體污染時(shí),原則上是能夠去除支原體的,但是整個(gè)過程耗時(shí)耗力,還要考驗(yàn)個(gè)人操作能力。所以如果不是處于細(xì)胞存量很少的情況下,建議發(fā)現(xiàn)污染時(shí)立刻棄掉,重新培養(yǎng)。

5、如果孵箱中只是某種細(xì)胞持續(xù)性大量死亡,而其他細(xì)胞狀態(tài)都沒問題的話,基本上可以確定就是孵箱存在特異性感染這類細(xì)胞的真菌或細(xì)菌,遇到這種情況,小六兒也不知道該怎么做,只能是先停一段時(shí)間看看。。。。。。

6、其他注意事項(xiàng):每個(gè)星期都要更換孵箱底盤中的水(紫外照射后超純水);每兩周消毒一次孵箱:75%酒精擦拭一遍后,再用0.1%新潔爾滅擦拭一遍(都用超純水配制);可以在孵箱底部放一個(gè)燒杯,里面放入飽和硫酸銅,可以抑制霉菌生長。不過也有人說硫酸銅會(huì)改變孵箱的PH值,如果不是孵箱污染的情況很嚴(yán)重,建議不要使用。

科研實(shí)驗(yàn)中,細(xì)胞的體外培養(yǎng)一直是一個(gè)重要環(huán)節(jié)。細(xì)胞要養(yǎng)好,就要用好血清,如Ausbian®特級胎牛血清,它適合各種細(xì)胞培養(yǎng),尤其適合難養(yǎng)細(xì)胞,如:干細(xì)胞、肝細(xì)胞,神經(jīng)細(xì)胞,原代培養(yǎng)、細(xì)胞融合、轉(zhuǎn)染細(xì)胞等。

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