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細(xì)胞培養(yǎng)一般過(guò)程主要都有哪些?

更新時(shí)間:2021-12-29  |  點(diǎn)擊率:896

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)指的是細(xì)胞在體外條件下的生長(zhǎng),在培養(yǎng)的過(guò)程中細(xì)胞不再形成組織(動(dòng)物)。培養(yǎng)物是單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞群。細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)都要生活在人工環(huán)境中,由于環(huán)境的改變,細(xì)胞的移動(dòng)或受一些其他因素的影響,培養(yǎng)時(shí)間加長(zhǎng),傳代導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)單一化型。

細(xì)胞培養(yǎng)一般過(guò)程主要包括以下幾點(diǎn):

1.準(zhǔn)備工作:準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒,培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌,無(wú)菌室或超凈臺(tái)的清潔與消毒,培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試。

2.取材:在無(wú)菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞(視實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?,經(jīng)過(guò)一定的處理(如消化分散細(xì)胞、分離等)后接入培養(yǎng)器皿中,這一過(guò)程稱為取材。如是細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)則無(wú)取材這一過(guò)程。機(jī)體取出的組織細(xì)胞的首ci培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。

3.培養(yǎng):將取得的組織細(xì)胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過(guò)程稱為培養(yǎng)。如系組織塊培養(yǎng),則直接將組織塊接入培養(yǎng)器皿底部,幾個(gè)小時(shí)后組織塊可貼牢在底部,再加入培養(yǎng)基。

4.凍存及復(fù)蘇:為了保存細(xì)胞,特別是不易獲得的突變型細(xì)胞或細(xì)胞株,要將細(xì)胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度-196℃,將細(xì)胞收集至凍存管中加入含保護(hù)劑(一般為二甲亞砜或甘油)的培養(yǎng)基,以一定的冷卻速度凍存,最終保存于液氮中。在極低的溫度下,細(xì)胞保存的時(shí)間幾乎是無(wú)限的。復(fù)蘇一般采用快融方法,即從液氮中取出凍存管后,立即放入37℃水中,使之在一分鐘內(nèi)迅速融解。然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進(jìn)行培養(yǎng)。


科研實(shí)驗(yàn)中,細(xì)胞的體外培養(yǎng)一直是一個(gè)重要環(huán)節(jié)。細(xì)胞要養(yǎng)好,就要用好血清,如Ausbian®特級(jí)胎牛血清,它適合各種細(xì)胞培養(yǎng),尤其適合難養(yǎng)細(xì)胞,如:干細(xì)胞、肝細(xì)胞,神經(jīng)細(xì)胞,原代培養(yǎng)、細(xì)胞融合、轉(zhuǎn)染細(xì)胞等。


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