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只用一招,簡(jiǎn)單祛除細(xì)胞上的支原體!

更新時(shí)間:2019-09-02  |  點(diǎn)擊率:2383

細(xì)胞培養(yǎng)怕支原體污染,但有一些被污染的細(xì)胞不能被丟棄時(shí)該怎么辦?今天小編把上慣用的一個(gè)小絕招教給你,簡(jiǎn)單有效!

 

如何祛除細(xì)胞上的支原體污染?

 

據(jù)研究表明,約98%的支原體存在于細(xì)胞表面和細(xì)胞間隙。支原體直徑約180~350nm,比細(xì)胞小很多,經(jīng)低速離心與細(xì)胞分離。通過(guò)反復(fù)懸浮沖洗、離心,加上使用我們的Zell Shield®,即可在細(xì)胞培養(yǎng)四代以?xún)?nèi)有效地祛除支原體。

 

什么是Zell Shield®?

Zell Shield®是一種鏈青霉素類(lèi)復(fù)合抗生素,

對(duì)細(xì)胞影響很小,可以有效抑制細(xì)胞培養(yǎng)中的

支原體、細(xì)菌、霉菌、真菌等微生物增殖。

普通的鏈霉素、青霉素對(duì)支原體沒(méi)有效果。

 

那為什么Zell Shield®有效呢?

因?yàn)閆ell Shield®是由Minerva公司生產(chǎn)的專(zhuān)門(mén)針對(duì)支原體的抗生素。

德國(guó)Minerva公司是由的羅伯特·科赫研究所中分離出來(lái)的,專(zhuān)注于支原體、細(xì)菌的污染控制,尤其以支原體和軍團(tuán)菌的祛除、檢測(cè)而聞名。Zell Shield®是Minerva公司的一項(xiàng)技術(shù)產(chǎn)品,不但對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)中的細(xì)菌、真菌、霉菌有效,更是對(duì)支原體的祛除有確切效果。

 

具體是怎么操作呢?

1.首先把被支原體污染的細(xì)胞消化下來(lái),

放入離心管離心,棄上清。

再加入干凈的PBS懸浮沖洗細(xì)胞、

低速離心(300~500r/min)、棄上清,

反復(fù)三次。

這樣可祛除細(xì)胞表面60%~70%的支原體,

支原體還剩約30%~40%.

2.細(xì)胞加入含1%Zell Shield®的新鮮培養(yǎng)基,

傳代培養(yǎng)。

這時(shí)因培養(yǎng)基中Zell Shield®的抑制作用

細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,

雖然細(xì)胞增殖,但殘留的支原體無(wú)法增殖。

細(xì)胞需再次傳代時(shí),把第二代細(xì)胞消化下來(lái),

離心,棄上清。

加入新鮮PBS懸浮沖洗、再離心、棄上清,

反復(fù)三次,

這時(shí),細(xì)胞上殘留的支原體大約已剩余為初污染量的10%左右。

3.細(xì)胞加入含1%Zell Shield®的新鮮培養(yǎng)基,

傳代培養(yǎng)。

需再次傳代時(shí)把第三代細(xì)胞消化下來(lái),

離心,棄上清。

加入新鮮PBS懸浮沖洗、再離心、棄上清,

反復(fù)三次,

可再次祛除60%~70%的殘余支原體,

通過(guò)沖洗、抑制、換液等操作,

細(xì)胞中支原體的殘留污染量大約只剩3%左右。

4.細(xì)胞加入含1%Zell Shield®的新鮮培養(yǎng)基,

傳代培養(yǎng)。

需再次傳代時(shí)把第四代細(xì)胞消化下來(lái),

離心,棄上清。

加入新鮮PBS懸浮沖洗、再離心、棄上清,

反復(fù)三次,

可再次祛除60%~70%的支原體,

此時(shí),支原體殘留量大約已低于1%.

 

支原體的增殖亦有密度要求,

用Zell Shield®處理過(guò)四代的細(xì)胞,

即便撤掉Zell Shield®,

只要保證沒(méi)有新的支原體人為再次帶入,

原有支原體也無(wú)法再增殖,

隨著傳代,換液,支原體的老化、死亡,

細(xì)胞中的支原體污染基本就*解決了。

 

敲黑板,劃重點(diǎn)啦

 

1.每次傳代時(shí),重復(fù)三次對(duì)細(xì)胞懸浮沖洗步驟非常重要,操作要正確、規(guī)范,以達(dá)效果!

 

2.在培養(yǎng)基中加入1%Zell Shield®抑制支原體增殖!

 

3.使用安全的血清、培養(yǎng)基等試劑,不再有新的支原體加入!

 

做到以上三點(diǎn)即可確保祛除支原體污染。

 

Zell Shield®工作原理是什么?

支原體祛除劑Zell Shield®(培養(yǎng)基用)

是一種即用型鏈青霉素類(lèi)的復(fù)合抗生素,

在培養(yǎng)基中1%的濃度

通過(guò)阻止原核生物DNA及蛋白的合成,

抑制細(xì)胞培養(yǎng)中遇到的

細(xì)菌、真菌、霉菌增殖,

更可以有效、地抑制支原體增殖,

且對(duì)細(xì)胞基本安全。

品名:支原體祛除劑Zell Shield®(培養(yǎng)基用)

生產(chǎn)商:Minerva Biolabs GmbH

生產(chǎn)地:德國(guó)

貨號(hào):13-0050

規(guī)格:50mL/瓶

儲(chǔ)存溫度:-18℃

使用注意事項(xiàng):實(shí)驗(yàn)室初次使用,注意分裝,分裝后的小包裝Zell Shield®仍-20℃避光冷凍保存,現(xiàn)配現(xiàn)用。

市場(chǎng)價(jià)格:2200元

貨期:大多數(shù)時(shí)間國(guó)內(nèi)有現(xiàn)貨

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