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大腸桿菌計數(shù)標準解讀ISO 16649-1:2018

更新時間:2019-06-18  |  點擊率:2110

大腸桿菌和糞大腸菌群的計數(shù)一致是一項食品衛(wèi)生的常規(guī)檢測。2018年,ISO發(fā)布了新版ISO 16649-1:2018,即“食品鏈的微生物學——β-葡萄糖醛酸酶陽性大腸桿菌計數(shù)的水平方法.第1部分 使用膜和5-溴-4-氯-3-吲哚β-D-葡萄糖醛酸酐在44℃的菌落計數(shù)技術”。

 

ISO 16649-1:2018取代的是ISO 16649-1:2001,在如下方面有修改:

1)環(huán)境和初級食品生產(chǎn)階段的取樣

2)對于TBX培養(yǎng)基(胰胨膽鹽葡萄糖醛酸酐瓊脂)孵育時間規(guī)定至少20h

3)添加了培養(yǎng)基和濾膜的性能試驗

4)為了安全性,不再推薦DMSO來溶解葡萄糖醛酸酶的顯色底物BCIG

5)無機鹽改良谷氨酸鹽瓊脂(MMGA)的組成進行了調(diào)整

該標準適合食品、飼料、食品生產(chǎn)車間的環(huán)境樣本等。

 

在流程上,可分為如下幾步:

1)復蘇。

用無菌鑷子夾一張膜放到MMGA培養(yǎng)基的干燥表面,避免膜下產(chǎn)生氣泡??捎猛坎及舭涯浩?。用無菌移液器將1ml樣本液加到膜中央,使用涂布棒將接種液均勻分布到整個膜表面。將平板在室溫靜置15分鐘,直到接種液浸透整個膜。再孵育4h±0.25h,37℃,膜/瓊脂表面朝上。

 

2)分離。

使用無菌鑷子將膜轉(zhuǎn)移到TBX培養(yǎng)基上。在孵箱中44℃孵育20h~24h。有藍色或藍綠色菌落則為葡萄糖醛酸酶陽性的大腸桿菌。選擇典型菌落數(shù)150的平皿進行計數(shù)。

 

3)結(jié)果計算和報告

 

世界微生物培養(yǎng)基生產(chǎn)商HiMedia公司提供有ISO的培養(yǎng)基,如無機鹽改良谷氨酸鹽瓊脂(Minervals-modified glutamate agar,MMGA),貨號為M643I,配方與ISO 16649-1:2018的*一致,只有氯化銨需用戶自己準備。對于TBX培養(yǎng)基,HiMedia公司提供有HiCrome™ E. coli Agar,貨號M1295I,配方與ISO 16649-1:2018的*一致。在該培養(yǎng)基中,大腸桿菌為藍綠色菌落,沙門氏菌為無色菌落,葡萄球菌被抑制生長(見下圖)。

 

 

 

 

HiMedia公司從1975年起即致力于微生物培養(yǎng)基和細胞培養(yǎng)基的生產(chǎn)和研發(fā),具有WHO GMP認證、ISO9001:2008,ISO13485:2003認證,CE認證和FDA注冊登記,尤其通過CE的體外診斷注冊。其產(chǎn)品行銷140多個國家。

 

締一生物作為HiMedia公司在中國的代理商,在微生物培養(yǎng)和檢測領域,一如既往地為您帶來的服務。

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